Método 1: Método de extracción (el método que se emplea actualmente en mi país; produce menor pureza pero ofrece menores costos de producción).
Extracción de solución de oxitocina: Tome 100 g de polvo de pituitaria posterior seca y 30 g de polvo de cuarzo, colóquelos en un molino de bolas y agregue agua destilada. Realice la extracción cuatro veces utilizando este mismo procedimiento. Los volúmenes de agua destilada añadidos para cada paso son los siguientes: 1,4 L para las dos primeras extracciones y 1,3 L para las dos siguientes. Cada extracción se realiza durante 45 minutos, seguida de una centrifugación para recoger el líquido; el residuo restante se somete luego a una extracción adicional. Los cuatro extractos resultantes se combinan para producir la solución de oxitocina. En resumen: Polvo de pituitaria posterior seco [Agua, Molino de bolas] → Extracto de oxitocina → Separación cromatográfica.
Tome 1500 g de zeolita sintética pre-tratada, agregue 20 litros de una solución de ácido acético al 0,25 % y-después de agitar-vierta la mezcla en una columna de intercambio iónico-. Una vez que el nivel de la solución de ácido acético haya descendido a un punto de 2 a 3 cm por encima de la superficie del lecho de zeolita, introduzca inmediatamente el extracto de oxitocina. Mantenga un caudal adecuado y recoja el eluato blanco y turbio resultante (esta fracción contiene principalmente oxitocina; dado que la oxitocina tiene un punto isoeléctrico [pI] de 7,7-mientras que la vasopresina tiene un pI de 10,9, la vasopresina forma fácilmente iones positivos y, por lo tanto, se adsorbe en la columna). Tan pronto como el nivel líquido del extracto descienda a la superficie del lecho de zeolita, agregue inmediatamente agua destilada y continúe recogiendo el eluato turbio hasta que cese el flujo. Ajustar el pH del eluato turbio recogido a 3,5 utilizando ácido acético glacial. Caliente rápidamente la solución en un baño de agua a 95 grados, mantenga esta temperatura durante 3 minutos, luego enfríe rápidamente la solución y refrigérela durante la noche. En resumen: Extracto de oxitocina [HAc, columna de zeolita sintética] → Eluato turbio [HAc, calentamiento] → Solución separada → Adsorción y elución. Al día siguiente, filtrar la solución refrigerada. Al filtrado, agregar una suspensión de bentonita al 10% mientras se agita (agregando 3 ml de suspensión por 100 ml de filtrado). Continuar agitando durante 1 hora para facilitar la adsorción, luego centrifugar la mezcla. Pruebe el líquido sobrenadante utilizando una solución reactiva de ácido sulfosalicílico; la ausencia de precipitado indica que el proceso de adsorción está completo. Si la adsorción es incompleta, repetir el proceso de tratamiento con bentonita; Posteriormente, combinar los precipitados de bentonita obtenidos de ambas etapas de adsorción. La bentonita se eluye cuatro veces usando ácido acético al 1% (con volúmenes de 1,6 l, 1,4 l, 1,2 l y 0,8 l, respectivamente). Para cada eluido, se añade tricloruro de *terc*-butilo una vez que la solución se calienta a 80 grados; Luego se eleva la temperatura a 95 grados, se enfría rápidamente a 25 grados y se filtra o centrifuga. Los cuatro filtrados resultantes se combinan para determinar la potencia y el límite de vasopresina. El flujo del proceso es el siguiente: Solución refrigerada [Filtración] → Filtrado [Lechada de bentonita] → Adsorbato [1% HAc] → Eluato. Preparación de la inyección de oxitocina:
La solución de oxitocina ensayada, habiendo cumplido los estándares de calidad, se diluye hasta una concentración de 5 U/mL o 10 U/mL. Luego se filtra a través de un embudo de vidrio sinterizado No. 4 o No. 5, se llenan en ampollas y se esterilizan con vapor a 100 grados durante 30 minutos para obtener el producto final. El flujo del proceso es el siguiente: Solución de oxitocina (ensayo aprobado) [Filtración, llenado, esterilización] → Inyección de oxitocina.
Regeneración de Zeolita Sintética: La zeolita sintética se lava dos veces con agua destilada. Luego, se añaden 1,5 l de agua (calculado en base a 500 g de zeolita) y 150 g de cloruro de sodio, y la mezcla se agita durante 2 horas para lavar y eliminar la vasopresina. Luego se lava la zeolita con agua destilada hasta que no queden iones cloruro. Se añade una cantidad apropiada de agua y el pH se ajusta a 9 usando hidróxido de sodio; la mezcla se agita durante 30 minutos, tras lo cual se decanta el sobrenadante. La zeolita se lava con agua destilada, el pH se ajusta a 5,5-6 usando ácido sulfúrico y se lava nuevamente con agua hasta que esté casi neutral. Luego se filtra para eliminar el exceso de agua y se seca a 105 grados para uso futuro. Antes de su uso, se agrega una cantidad adecuada de agua y se ajusta el pH usando ácido acético glacial mientras se agita para permitir el remojo. Preparación de lechada de bentonita al 10 %: la bentonita y el agua se mezclan en una proporción de masa-a-volumen de 1:10. La mezcla se muele durante aproximadamente 1 hora, tiempo durante el cual se añade ácido acético para mantener un pH estable de 3,5. Luego, la suspensión resultante se almacena en un refrigerador para uso futuro. Método 2: Síntesis química. Primero, la amida del heptapéptido (segmentos 3 a 9) se sintetiza a partir de éster de benciloxicarbonil-leucina *p*-nitrofenilo; a continuación, se sintetiza benciloxicarbonil-S-bencilcisteína-tirosina azida (segmentos 1 a 2); y en el tercer paso se sintetiza la oxitocina.